ВЫЯВЛЕНИЕ СВОБОДНЫХ ОТ СЕЛЕКТИВНОГО МАРКЕРНОГО ГЕНА ГЕНОТИПОВ СРЕДИ ПОПУЛЯЦИЙ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО СОРТА ХЛОПЧАТНИКА

Аннотация

Данная статья посвящена современным стратегиям и методам получения трансгенных растений без селективных маркерных генов. Приведена классификация наиболее применяемых в мире методик. Также представлен способ выполнения поисковых работ по выявлению из популяции хлопчатника сорта Порлок-1 безканамициновых генотипов. В сконструированные для трансформации плазмидные векторы обязательно включают гены, позволяющие идентифицировать трансформантов. Это, как правило, гены устойчивости к антибиотикам (например, гены неомицинфосфотрансферазы (npt II) и гигромицинфосфотрансферазы (hpt)), продукты которых обеспечивают рост трансформированной растительной ткани на селективной среде. За свою основную функцию, выполняемую в процессе генно-инжеренных работ они получили название – селективные маркерные гены (СМГ). После скрининга трансформированных клеток эти гены утрачивают свое значение, но остаются в геноме трансформантов. Так как такие последовательности стали называться «генетическим грузом» и даже «генетическим мусором», появилась необходимость удаления из генома растений таких генов. Представленная работа на хлопчатнике проводится впервые, как и технология РНК-интерференции для хлопчатника, изменившая качественные характеристки волокна. В ходе наших исследований получено более 259 растений (первый год анализа), которые размножены в 2019 году, 55% из них дают негативный ПЦР-результат с парой праймеров Kan F/Kan R.