ОБОСНОВАНИЕ МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ  β-ГАЛАКТОЗИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Е. М. Серба; М. Б. Оверченко; Н. И. Игнатова; М. Е. Медриш; Л. В. Римарева

doi:10.30850/vrsn/2018/6/65-68

Е. М. Серба, доктор биологических наук, профессор Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии – филиал ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»
М. Б. Оверченко, кандидат технических наук Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии – филиал ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»
Н. И. Игнатова Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии – филиал ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»
М. Е. Медриш, кандидат технических наук Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии – филиал ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»
Л. В. Римарева, академик РАН Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии – филиал ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»

DOI: https://doi.org/10.30850/vrsn/2018/6/65-68

Аннотация

Ферментные препараты – источники β-галактозидазы, находят широкое применение в молочной промышленности. Однако отсутствуют стандартизированные методы определения их активности. Существующие методы различаются по виду используемого субстрата, условий проведения анализа и способа определения продуктов гидролиза. Цель работы – исследование процесса биокаталитической конверсии молочного сахара и экспериментальное обоснование метода анализа продуктов гидролиза, обеспечивающего получение достоверных результатов определения β-галактозидазной активности. Установлено, что из химических методов глюкозооксидазный проявил более высокую чувствительность по отношению к низким концентрациям продукта гидролиза – глюкозе, образующейся в процессе конверсии лактозы. Результаты апробации показали, что массовая концентрация глюкозы, образуемой в процессе гидролиза лактозы, тестируемой ВЭЖХ, соответствовала полученным данным с использованием глюкозооксидазного метода. Установлен оптимальный диапазон, в котором наблюдалась прямо пропорциональная зависимость уровня нарастания концентрации глюкозы в реакционной смеси от длительности процесса и фермента: время гидролиза – от 10 до 20 мин., концентрация образующейся глюкозы - от 20 мкг до 40 мкг при массе фермента 25,0·10^-6г, и от 40 мкг до 80 мкг при массе - 5,0·10^-5 г. Оптическая плотность реакционной смеси находилась в пределах 0,045-0,300. Результаты исследований по определению активности ферментных препаратов подтвердили подученные экспериментальные данные и позволили выбрать оптимальные параметры и условия проведения анализа для введения их в методику определения β-галактозидазной активности фотоколориметрическим методом с применением глюкозооксидазного реактива: время инактивации фермента (для контроля) – 10 мин. в кипящей водяной бане, субстрат – 2%-й раствор лактозы, рН субстрата – 6,0, время гидролиза 15 мин. при 30 °С.

Литература

1. ГОСТ Р 53330–2011. Ферментные препараты для пищевой промышленности. Методы определения амилолитической активности//Стандартинформ, 2011.
2. ГОСТ Р 55302–2012. Ферментные препараты для пищевой промышленности. Методы определения ксиланазной активности//Стандартинформ, 2012.
3. ГОСТ Р 53974–2010. Ферментные препараты для пищевой промышленности. Методы определения протеолитической активности //Стандартинформ, 2011.
4. Грачева, И.М. Технология ферментных препаратов/ И.М. Грачева, А.Ю. Кривова, / М: Изд.: «Элевар». – 2000. – 512 с.
5. Полыгалина, Г.В. Определение активности ферментов/Г.В. Полыгалина, В.С. Чередниченко, Л.В. Римарева. Справочник. – М.: ДеЛипринт, 2003. – 372 с.
6. Поляков, В.А. Применение жидкостной хроматографии для исследования органических кислот и углеводов в сусле и бражке/В.А. Поляков, И.М. Абрамова, М.Э. Медриш и др. // Хранение и переработка с-х.сырья.–2017.–№ 9.–С.20-23.
7. Римарева, Л.В. Ферментные препараты и биокаталитические процессы в пищевой промышленности/Л.В. Римарева, Е.М. Серба, Е.Н. Соколова, Ю.А. Борщева, Н.И. Игнатова //Вопросы питания. - 2017. - Т. 86. - № 5. - С. 80–91.
8. Серба, Е.М., Разработка национальных стандартов по методам определения активности ферментных препаратов для пищевой промышленности/Е.М. Серба, М.Б. Оверченко, Н.И. Игнатова и др. //Пищевая промышленность. – 2013. - № 7 – С. 40-44.